【产品名称】

中文名称：人NK细胞高效扩增试剂盒

英文名称：Human NK cell robust expansion kit

【编号】

CT-001

【包装规格】

2L/套

【试剂盒组成】

【预期用途】

适用于从人单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成NK细胞。

【贮藏条件与有效期】

NK-I，NK-III，NK-IV，IL-2置于2-8°C保存，有效期为12个月；NK-II置于-20°C保存，

有效期为24个月，置于2-8°C时，有效期则为3个月，并勿反复冻融；

生产日期，有效期至：见标签。

【产品简介】

NK细胞是人体免疫的第一道防线，具有非限制性杀伤的特点，如何发挥NK细胞的免疫作用从而治疗肿瘤等疾病是一个重要的课题。因为NK细胞仅占外周血的5-10%，细胞数量的稀少往往是制约研究的一个重要原因。本产品用于从单个核细胞（MNC）在体外高效扩增成NK细胞，具有扩增效率高，目的细胞百分比高的特点，起始单个核细胞经过14天培养，总细胞数可以扩增约50倍左右，NK细胞数可以扩增500倍以上，且纯度可达70%-85%（由于个体差异，有的样品诱导后NK细胞纯度低于70%或高于85%）。

【操作步骤】

1. D0 将制备好的单个核细胞（MNC）按1M cells/mL 细胞密度铺于T-75瓶中，加入NK-IV

培养基45mL，NK-I 125μL ，NK-II 5mL ，NK-III 250mg（500mg/支用1mL NK-IV培养基

溶解，可用于2套NK细胞高效扩增试剂盒）以及 IL-2 50μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL）；

注意：

1）IL-2 使用1mL NK-IV培养基溶解后（IL-2溶解后浓度为1000IU/mL），可存于2-8°C冰箱，存放时间不超过两周。建议将IL-2溶解后分装于无菌试剂管后保存于-20°C冰箱，使用时溶解即可，注意不要反复冻融，且不可使用长期置于2-8°C的IL-2，否则将严重影响本试剂盒的扩增效果；

2）请勿将NK-II 从-20°C冰箱中取出后直接置于37°C中；

3）NK-II溶解完全后，轻轻摇晃瓶身，使其温度与成份均一，摇晃时，请小心避免气泡产生；

4）解冻时，若有蛋白沉淀产生属于正常现象，若该沉淀影响观测，可通过离心或0.22um滤器过滤去除；

5）在细胞铺加后与D4补液之前的这段时间内，尽可能不要移动培养瓶，以免使其受到温度变动，震荡等物理因素的干扰。

2.D4 补加90ml NK-IV培养基，NK-II 10mL，IL-2 100μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL），转入细胞培养袋，此时袋子含150mL培养基；

注意：

1）为使更多的细胞转入到培养袋中，可先将T-75瓶中的细胞吹打均匀，全部转入培养袋中，再用部分新鲜配制的培养液润洗培养瓶，并再次转入培养袋中，最后补齐培养液即可；

2）在此次补液以及后续的补液操作中，尽可能先将NK-IV培养基预先37°C温浴，从而使细胞的培养温度在较小的范围内波动。

3.D6 往培养袋补加135mL NK-IV培养基，NK-II 15mL，IL-2 150μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL），此时袋子含300mL培养液；

4.D8 往培养袋补加270mL NK-IV培养基，NK-II 30mL，IL-2 300μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL），分成两袋，每个袋子含300mL培养液；

5.D10 分别往每个培养袋补加280mL NK-IV培养基，NK-II 20mL，IL-2 300μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL），此时每个袋子含600mL培养液；

6.D12 分别往每个培养袋补加400mL NK-IV培养基，IL-2 400μL（即IL-2终浓度为1000IU/mL）此时每个袋子含1000mL培养液；

7.D14天收获NK细胞。

【注意事项】

1. 在使用本试剂盒时，可先将NK-I试剂管低速离心（如1