产品简介

DiO和DiI可分别适配标准FITC和TRITC滤光片；

DiD能被633 nm氦氖激光有效激发，其激发与发射波长较DiI更长，因此适用于本身具有强自发荧光的细胞或组织标记。

DiR由于红外光在生物组织中穿透性强且该波段自发荧光极低，成为活体成像或细胞示踪研究的理想选择。

实验方案

细胞膜荧光探针（DiO/DiI/DiD/DiS/DiR）标记操作流程

DiO，DiI，DiD，DiS或DiR膜染色溶液：

DMSO或EtOH储备液：

使用DMSO或乙醇配制1-5 mM储备液

注意：未使用的母液需-20℃避光保存，避免反复冻融

工作溶液：

用无血清培养基、HBSS或PBS稀释储备液，配制1-5 μM工作液

注意：合适的工作浓度需根据细胞类型优化，建议测试至少10倍浓度梯度

悬浮细胞

1. 将细胞以1×10⁶/mL的密度悬浮于染料工作液中

2. 37℃孵育2-20分钟（不同细胞类型需优化时间，建议从20分钟开始测试）

3. 1000-1500 rpm离心5分钟

4.取出上清液，将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中

5.重复洗涤2次（步骤同3-4）

 贴壁细胞

1.在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

2.从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地沥出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.加入100 μL染料工作液，轻摇使液体覆盖全部细胞

4. 37°C孵育2-20分钟。 （不同细胞类型需优化时间，建议从20分钟开始测试）

5.排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片2-3次。（每次加入培养基后孵育5-10分钟）

4.显微镜检测：

1.说明书中的表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。

2.为了同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：

a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

5.流式细胞仪检测：

各染料对应检测通道：

DiO→FL1 | DiI→FL2 | DiD→FL3 | DiS/DiR→FL4