「DIFF CRO」助力基孔肯雅热病毒（CHIKV）创新药研发，提供整合型解决方案

基孔肯雅热假病毒中和抗体检测

「DIFF CRO」提供基于CPE法的中和抗体检测服务（图1），该检测方法灵敏度高、检测迅速，并且该实验方法的特异性、重复性均能满足中和实验的要求，适用于高通量样本的检测。

图1. 基孔肯雅热假病毒中和抗体检测流程图

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服务内容

表1.CHIKV血清中和抗体检测服务

针对基孔肯雅热假病毒的蛋白酶抑制剂筛选

新型基孔肯雅热病毒蛋白酶抑制剂的发现对于抗基孔肯雅热病毒药物研发至关重要，其蛋白酶抑制剂靶点为nsP2半胱氨酸蛋白酶。在大量化合物中寻找CHIKV蛋白酶抑制剂的过程中，行业急需一种可实现无需活病毒参与的细胞水平的正向筛选方式，以助力新药研发。

由「DIFF CRO」开发的蛋白酶抑制剂筛选系统，可在细胞水平直接模拟病毒自然感染过程，杜绝漏筛和假阳性等情况。我们以检测和筛选SARS—COV—2药物为例，展示「DIFF CRO」的蛋白酶抑制剂筛选系统的一系列优势：

1）最简便-肉眼观测

DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统可通过肉眼直接观察药物反应的荧光变化（图2），进行定性判断。

图2. SARS—COV—2阳性药物GC376添加不同浓度SARS—COV—2的3CL蛋白酶抑制剂后24h,48h,72h细胞GFP表达情况

2）最准确

原理可靠

本系统基于特制质粒的共表达机制，以SARS—COV—2为例，结合重组绿色荧光蛋白（rGFP）和SARS—COV—2的3CL蛋白酶。在该系统中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特异性切割位点。当3CL蛋白酶功能正常时，会特异性裂解rGFP，导致其荧光功能丧失，荧光强度减弱。相反，当抑制剂有效抑制了3CL蛋白酶的活性时，rGFP无法被切割，维持其完整性并正常发出荧光，荧光强度增强（图3）。药物有效性与荧光强度成正相关，是一种更直观的正向筛选方式。

图3. DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统原理图

结果准确

系统实验结果与真病毒检测结果高度一致。使用活病毒进行检测，GC376的IC50值为4.69μM；而采用DIFF筛选系统，IC50值为6.44μM，两种方法测得的IC50值高度相近（图4,5）。

图4. 使用活病毒和DIFF筛选系统测得的IC50值

图5. 添加不同浓度SARS—COV—2蛋白酶抑制剂72h后荧光检测值

3）可进行高通量筛选

系统检测的荧光值低而信噪比好，可联合现有药物库，一周即可筛选1-10万个基孔肯雅热病毒药物候选化合物，快速锁定有效药物（图6）。

图6. 高通量筛选操作示意图